紫外分光光度法是根據物質的吸收光譜,來研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質的吸收光譜就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。
實驗室選擇時需要根據自己實驗室的需要和目的用途來考慮,光學構造和光源、探測方法、樣品類型和數據處理等都是要考慮的因素。
光源和檢測方法
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。實驗室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細菌的生長情況。
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素燈一般只覆蓋可見光部分(大約380 nm 到800 nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
分光光度計的帶寬很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧嶒灳_要求的譜。一種嚴格帶寬使得儀器能對復雜的混合物進行高分辨率的吸光測量。可變的單色儀的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。
光學構造
一般來說,紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類。顧名思義,單光束型主要是依賴單束光進行測量。一束給定波長的光通過對照物,然后再通過實際樣品溶液,就能得到吸光結果。
雙光束型則是通過一個斬光輪將一束光分成兩束,分別測量對照樣品和實際樣品。可以最小化光漂移和減少測量時間。一些雙光型光度計不利用斬光輪,而是利用一種光束分光器來代替,將一束光分成兩束平行的光然后同時測量對照樣品和目的樣品。因為增加了測量的速度,所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態(tài)變化的研究中大有用處。
樣品類型
在大部分的樣品類型中,分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實驗室需求。但盡管對于小實驗室來說,制造商仍然提供了多種容器轉換器來滿足通量的要求和減少實驗時間。
用小試管cuvette裝樣品容量一般從1 μl-5ml,并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。體現(xiàn)了柔韌性。
數據管理
大部分單機型的分光光度計包含了驅動儀器運行和管理數據的軟件。高性能的儀器,通常與PC機一起聯(lián)用,需要從制造商提供額外的軟件。同時用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要。
另外一個值得考慮的因素是數據的最終使用。各獨立實驗室都有各自感興趣的實驗結果。例如一些藥物機構需要考慮美國FDA的要求和歐聯(lián)盟的藥物評價機構的要求選擇不同的數據處理方式。